原文標(biāo)題：Effect of storage temperature time on PRRSV RT-qPCR testing
PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性受到樣品采集、儲存、運(yùn)輸和處理過程以及存儲溫度和時間的影響。盡管這是共識，但是這些影響因素對病毒RNA的影響缺乏探索和量化。本研究通過RT-PCR定量分析存儲溫度、時間對血清、口腔液和糞便中PRRSV RNA和豬內(nèi)參基因（internal sample control, ISC）檢測的影響。本研究中的血清（n=5）來自實(shí)驗(yàn)性感染PRRSV野毒的豬，口腔液（n=5）、糞便（n=5）樣本來自免疫PRRSV MLV單獨(dú)飼養(yǎng)的豬。
每一個樣本被分為28等份，500μL/ 份，每份對應(yīng)一種溫度和時間的處理組合，即4℃、10℃、20℃和30℃，每種溫度處理分別對應(yīng)24、48、72、96、120、144或者168小時處理時間。處理結(jié)束后采用RT-qPCR進(jìn)行定量檢測PRRSV和ISC。將RT-qPCR的結(jié)果――定量循環(huán)數(shù)（quantification cycle, Cq）進(jìn)行立方根轉(zhuǎn)換，并將其定義為“標(biāo)準(zhǔn)效率循環(huán)值”（efficiency standardized Cqs, ECqs）用于分析。溫度和時間的影響采用Rv.4.2.1進(jìn)行混合效應(yīng)回歸模型分析（表3），得到不同溫度下每經(jīng)過24h PRRSV RNA的RT-qPCR的下降值，括號內(nèi)為下降的百分比。
總之，在本研究結(jié)果中，血清保持在4℃、10℃和 20℃下186小時對PRRSV的檢測沒有影響，但是保存在30℃時會導(dǎo)致PRRSV RNA的檢測值的損失。豬血清在4℃和 10℃時，ISC穩(wěn)定，但是在20℃和30℃時可觀察到明顯影響。無論在什么溫度下，口腔液和糞便中PRRSV和 ISC RNA都不穩(wěn)定。基于這樣的結(jié)果，我們建議采用RT-qPCR檢測PRRSV的血清樣本應(yīng)存儲在≤20℃。相反，口腔液和糞便樣本，在檢測以前應(yīng)當(dāng)冷凍保存（-80℃），避免PRRSV RNA的降解，即出現(xiàn)假陰性。
來 源：2023 NAPRRS/NC229: Proceedings of International conference of Swine Viral Diseases
